Činnost imunochemické laboratoře Ústavu biochemie a mikrobiologie, VŠCHT v Praze je zaměřena na vývoj a aplikaci imunochemických technik v analyse potravin. Jsou zde vyvíjeny a používány především metody, ve kterých jsou použity značené reagencie. Pracovnící laboratoře mají zkušenosti s testováním metod RIA a ELISA pro detekci, nebo kvantifikaci nízkomolekulárních látek (aflatoxin B1 a M1, histamin, benzo(a)pyren, DDT, α-endosulfan), vysokomolekulárních analytů (lysozym, vaječný albumin, zvířecí imunoglobuliny, pepsin, proteinasa z plísně Mucor miehei, (Fromase), mléčné proteiny, hordein) i nadmolekulárních struktur (bakteriální buňky). V poslední době se činnost laboratoře orientuje na vývoj rychlých metod detekce pathogenních mikroorganismů rodu Campylobacter, Cronobacter, Salmonella a Yersinia v potravinách a potravinářských surovinách. Řešení této problematiky zahrnuje následující kroky:
- příprava imunogenu
- isolace a purifikace imunoglobulinové frakce
- značení imunoglobulinů enzymovým markerem
- stanovení pracovních podmínek vyvíjené imunochemické metody
- charakterisace protilátek
- validace vyvinuté metody.
Vedle vývoje imunochemických metod se činnost laboratoře orientuje také na identifikaci a charakterisaci potravinářsky významných mikrobiálních pathogenů a to především z čeledi Enterobacteriaceae. V rámci řešených výzkumných projektů spolupracuje tým imunochemické laboratoře s dalšími specialisovanými pracovišti např. na Universitě Karlově (Ústav biofyziky a informatiky), Veterinární a farmaceutické universitě v Brně(Ústav hygieny a technologie masa), Ústavu makromolekulární chemie AV ČR a na Ústavu živočišné fyziologie a genetiky AV ČR.
Aktuálně řešené projekty
Isolace, typisace a vývoj imunochemických a instrumentálních metod pro detekci a charakterisaci bakterií Cronobacter sp.
Cronobacter sakazakii je potravinářsky významný pathogen z čeledi Enterobacteriaceae, který vyvolává u člověka vzácná, avšak život ohrožující onemocnění. Hlavní rizikovou skupinou jsou kojenci. Cronobacter u této skupiny obyvatel vyvolává meningitidy, nekrotizující enterokolitis a septikémie. Kojenecká úmrtnost je v případě meningitid vysoká a pohybuje se v rozmezí 40-80 % přičemž k úmrtí často dochází již v průběhu několika hodin po prvních projevech onemocnění. Jedinci kteří přežijí obvykle trpí závažnými neurologickými následky. Jako zdroj nákazy byla identifikována umělá kojenecká výživa.
Projekt Isolace, typisace a vývoj imunochemických a instrumentálních metod pro detekci a charakterisaci bakterií Cronobacter sp. je zaměřen na: a) vývoj rychlých metod (ELISA, biosensor) pro detekci a screening bakterií rodu Cronobacter přímo v dětské výživě, mléčných výrobcích a ostatních druzích potravin, b) vývoj metod (serotypisace, MALDI-TOF) usnadňujících charakterisaci isolovaných kmenů bakterií, c) vývoj multifunkčních magnetických částic určených jak pro separaci buněk kronobakterií, tak jako alternativní tuhá fáze pro enzymovou imunochemickou analysu, d) isolaci, identifikaci a charakterisaci kronobakterií získaných z různých potravinářských a veterinárních vzorků.
Spolupráce
- Prof. Ing. Milan Marounek, DrSc.
- Ústav živočišné fyziologie a genetiky AV ČR, v.v.i., Rumburská 89, Liběchov
- Ing. Daniel Horák, CSc., Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v.v.i., Heyrovského náměstí 1888/2, Praha 6
- RNDr. Jiří Škvor, CSc.
- Univerzita Karlova, 1. lékařská fakulta, Ústav biofyziky a informatiky, Ovocný trh 5, Praha 1
Podpora
- GAČR P503/10/0664
Vybrané publikace
Differentiation of Cronobacter spp. by tryptic digestion of the cell suspension followed by MALDI-TOF MS analysis
J Microbiol Meth 2014; 98():105-113
DOI: 10.1016/j.mimet.2014.01.008
Identification of bacteria using mass spectrometry
Int J Mass Spec 2013; 353():67-79
DOI: 10.1016/j.ijms.2013.04.016
Occurrence of Cronobacter spp. in retail foods
J Appl Microbiol 2012; 112(6):1257-1265
DOI: 10.1111/j.1365-2672.2012.05292.x
Metody detekce a charakterizace Campylobacter sp.
Chem Listy 2009; 103():814-822
Characterization of antibodies for the immunochemical detection of Enterobacter sakazakii.
Czech Journal of Food Science 2009; 27():S2-66-S2-74
Deoxynivalenol and its conjugates in beer: A critical assessment of data obtained by enzyme-linked immunosorbent assay and liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry.
Anal Chim Acta 2008; 625():77-86
DOI: 10.1016/j.aca.2008.07.014
Detection of Campylobacter species in foods by indirect competitive ELISA using hen and rabbit antibodies.
Food Agric Immunol 2007; 18():151-167
DOI: 10.1080/09540100701666857
Immunochemical determination of gluten in malts and beers.
Food Addit Contam 2006; 23(11):1074-1078
DOI: 10.1080/02652030600740637
Development of an Indirect Competitive ELISA for Detection of Campylobacter jejuni subsp. jejuni O:23 in Foods.
Folia Microbiol 2004; 49():579-586
Development of an Indirect Competitive ELISA of DDT.
Food Agric Immunol 2002; 14():285-300
DOI: 10.1080/0954010021000096391
Užitečné odkazy
Imunochemie, protilátky, antigeny
- The Antibody Resource Pages
- Antibody Structure (University of Arizona)
- Predicted Antigenic Peptides (Cancer Vaccine Center Bioinformatics)
- Prediction of Immunoglobulin Structure
- Abnum
- ECACC - European Collection of Cell Cultures
Databáze
- EMBL-EBI (European Molecular Biology Laboratory-European Bioinformatics Institute)
- GenBank
- Swiss-Prot
- UniProt
- Protein Data Bank
- Protein Information Resource
- Wellcome Trust Sanger Institute
- REBASE The Restriction Enzyme Database
Chemická a biochemická nomenklatura
Atomová hmotnost prvků
Sbírky mikroorganismů
- ATCC American Type Culture Colection, Corporate: 10801 University Boulevard, Manassas, VA, 20110-2209, U.S.A.
- CCM Czech Collection of Microorganisms Masaryk University, Tvrdého 14, 602 Brno, Czech Republic
- CCUG Culture Collection University of Göteborg
- CCY Culture Collection of Yeasts - Institute of Chemistry, Dúbravská cesta 9, SK-845 38 Bratislava, Slovak Republic
- CNCTC Czech National Collection of Type Cultures, Šrobárova 48, Prague 10, Czech Republic
- DSMZ German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Inhoffenstraβe 7B, 38124 Braunschweig, Germany
- JCM Japan Collection of Microorganisms - RIKEN BioResource Center, 2-1 Hirosawa, Waco, Saitama 351-0198, Japan
- NCTC National Colection of Type Cultures, Health Protection Agency Culture Collections, Porton Down, Salisbury, SP4 0JG United Kingdom
Taxonomie bakterií a mikroskopických hub
- DSMZ - Bacterial Nomenclature
- List of Procaryotic Names with Standing in Nomenclature (J.P. Euzéby)
- Mycobank
- International Code of Botanical Nomenclature (IAPT - International Association for Plant Taxonomy)
- The Aspergillus Web Site
Zdravotnické organizace
Normy, metrologie, státní zkušebnictví
Lidé a kontakty
doc. Ing. Igor. Hochel, CSc. (místnost B244/V02, tel: +420 220 445 166/3019, email: Igor.Hochel@vscht.cz)