Kalendář akcí FPBT VŠCHT Praha Večerní hlídání

Nacházíte se: VŠCHT Praha – FPBT – Ústav biochemie a mikrobiologie → Vědecké zaměření ústavu → Vědecké skupiny → Laboratoř aplikované proteomiky → Přístrojové vybavení

iduzel: 76547
idvazba: 94446
šablona: stranka
čas: 29.4.2024 07:17:52
verze: 5378
uzivatel:
remoteAPIs:
branch: trunk
Server: 147.33.89.150
Obnovit | RAW

iduzel: 76547
idvazba: 94446
---Nová url--- (newurl_...)
domena: 'biomikro.vscht.cz'
jazyk: 'cs'
url: '/vyzkum/vedecke-skupiny/proteomika/vybaveni'
iduzel: 76547
path: 8548/29628/29629/29705/29759/29793/29795/76547
CMS: Odkaz na newurlCMS
branch: trunk
Obnovit | RAW

Přístrojové vybavení

Domů Projekty Přístrojové vybavení Tým & Publikace

Naše hmotnostní spektrometry:

MALDI-TOF (Autoflex Speed, Bruker), LC-ESI-Q-TOF (Maxis Impact, Bruker) a nejnověji LC-timsTOF HT (Bruker)


                           MALDI-TOF                                                                                LC-ESI-Q-TOF                                                                                       LC-timsTOF HT

MALDI-TOF: je zkratka pro matricí asistovanou laserovou desorpci/ionizaci (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization) s analyzátorem doby letu (Time Of Flight). Vzorek je předem smíchán s matricí (např. s deriváty kyseliny benzoové, skořicové), a pak je ozářen laserem. Matrice pohlcuje energii laseru, předává protony molekulám analytu, čímž mu dodává elektrický náboj a tím dochází k jeho desorpci a ionizaci, aniž by analyt fragmentoval. Takto vytvořené pozitivní nabité ionty analytu putují trubicí analyzátoru a dochází k separaci dle molekulové hmotnosti, kdy ionty s nižší molekulovou hmotností dorazí k detektoru za kratší dobu než ionty s vyšší molekulovou hmotností. Měřit lze ale i v negativním módu. Na výstupu se měří čas, za který ionty urazí konstantní dráhu k detektoru, podle čehož se určí jejich m/z. MALDI-TOF je vhodnou metodou k identifikaci mikroorganizmů, analýze biomolekul, jako jsou proteiny, lipidy, sacharidy nebo jiné organické makromolekuly.

LC-ESI-Q-TOF (Liquid Chromatography Electrospray Ionization Quadrupole Time Of Flight Mass Spectrometry) je analytickou technikou, která kombinuje separační schopnosti kapalinové chromatografie (LC) s vysokou citlivostí a přesným měřením pomocí hmotnostní spektrometrie (MS). Tato technika se skládá ze série integrovaných procesů. Analyt je nejdřív separován pomocí kapalinové chromatografie. Předseparovaný vzorek je dál ionizován pomocí elektrospreje a vzniklé ionty jsou přenesený dál do kvadrupólu, který funguje jako hmotnostní filtr. U vybraných iontů se dál měří doba letu, který jím trvá na cestě od ionizačního zdroje k detektoru. Měřením času letu iontů lze přesně stanovit poměr m/z a tím i hmotnost iontů. Vedle měření hmotnosti iontů, je možné také studovat strukturu iontů po jejich selekci v kvadrupolu a následné fragmentaci v kolizní cele. Tato technika umožňuje přesnou identifikaci a kvantifikaci široké škály sloučenin přítomných v komplexních směsích a nachází uplatnění v různých oblastech, včetně farmacie, analýzy životního prostředí, metabolomiky, proteomiky, analýzy potravin atd.

LC-timsTOF HT je spojení kapalinové chromatografie s hmotnostním spektrometrem a je využíván k tzv. shotgun proteomice. Oproti předchozímu LC-ESI-Q-TOFu je zde mezi ESI zdroj a první kvadrupól vložena TIMS cela (Trapped Ion Mobility Spectrometry; iontová mobilitní spektrometrie se záchytem iontů), která umožnuje separovat ionty na základě jejich velikosti a tvaru. TIMS cela se skládá ze tří částí – vstupního trychtýře, mobilitního analyzátoru a výstupního trychtýře. Ionty analytu jsou unášeny nosným plynem, v protisměru však působí síla elektrického pole. V oblasti, kde je síla elektrického pole taková, že rychlost pohybu daného iontu je rovna rychlosti proudění nosného plynu, se daný iont zastaví. Ionty se tak před elucí do hmotnostního spektrometru akumulují na základě jejich rozdílné mobility. Postupnou změnou elektrického potenciálu pak dochází k postupné eluci zachycených iontů dále do Q-TOF. Díky tomu, že timsTOF HT využívá paralelní akumulaci-fragmentaci prekurzorových iontů (PASEF), tj. fragmentaci více prekurzorů během jednoho skenování, dochází k mnohonásobnému zvýšení rychlosti sekvenování, a to bez ztráty signálu, rozlišení a citlivosti. Oproti LC-ESI-Q-TOF lze získat řádově vyšší počet identifikovaných peptidů.

Aktualizováno: 12.3.2024 14:21, Autor: Michal Strejček